Expresión de mCherry estable para marcar bacterias Gram-negativas y observarlas en su ambiente
El uso de proteínas fluorescentes para marcar células no sólo prometía ser importante como marcador de selección, ha sudo de gran utilidad para visualizar y monitorear bacterias en su ambiente. Comunmente se han usado plásmidos con la proteína fluorescente expresada de forma constitutiva, sin embargo, el problema con esta metodología es que para preservar al plásmido dentro de la célula ha sido necesario la adición de antibióticos. En este trabajo los autores se dieron a la tarea de clonar la proteína roja fluorescente (DsRed) mCHerry en tres diferentes vectores, (los plásmidos pME6031 y pBBRMCS-5 y el vector pBK-miniTn7 que puede integrarse al genoma, y transformarlo cepas gram negativas para evaluar la expresión de la proteína y la preservación del plásmido a través del tiempo, (sin la adición de antibiótico al medio). Fue posible monitorar las cepas in vitro (formación de biofilms en vidrio) e in vivo, la colonización de Pseudomonas putida PCL1445. Los resultados mostraron que el constructo con el plásmido pMP7604 se matuvo sin la presión del antibiótico (no se observó pérdida del plásmido) y que el constructo con el plásmido pMP7607 mostró una pérdida del 3% en la población durante los primeros tres días. Estos constructos estan disponibles si se ponen en contacto con al autor de correspondencia.
Obtenida de Lagendijk. FEMS Microbiol Lett 305 (2010) 81–90.
Bibliografía: Lagendijk EL, Validov S, Lamers GEM, de Weert S & Guido V (2010) BloembergGenetic tools for tagging Gram-negative bacteria with mCherry for visualization in vitro and in natural habitats, biofilm and pathogenicity studies. FEMS Microbiol Lett 305 : 81–90.
